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发布时间：2021/6/10 8:52:08 阅读次数：1238
样本处理及要求
1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20
分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000
×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
3. 组织匀浆:用预冷的PBS （0.01M, pH=7.4）冲洗组织,去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞
会影响测量结果）,称重后将组织剪碎.将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量
体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记
录.推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨.为了进一步裂
解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融.后将匀浆液于5000×g离心5~10
分钟,取上清检测.
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置
于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.订购联系当地经销商 技术:经销商转厂家
注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测.
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
名称 96 孔配置 48 孔配置 备注
微孔酶标板 12 孔×8 条 12 孔×4 条 无
标准品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 无
样本稀释液 6mL 3mL 无
检测抗体-HRP 10mL 5mL 无
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物 A 6mL 3mL 无
底物 B 6mL 3mL 无
终止液 6mL 3mL 无
封板膜 2 张 2 张 无
说明书 1 份 1 份 无
自封袋 1 个 1 个 无
备注:
1. 标准品浓度依次为:48 24 12 6 3 1.5 nmol/L
2. 经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中
直接取50μL样本上样即可.当有部分样本值超过大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本
进行适当稀释后再进行实验.
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果.所有试剂都必须在使用前达到室
温 20-25℃.使用后立即冷藏保存试剂.
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果.在加入底物前确保尽量吸干孔内液体.温育过程中
不要让微孔干燥掉.
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值.
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用.
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果.
6. 在储存和温育时避免强光直接照射.订购联系当地经销商 技术:经销商转厂家
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上.
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体.任何漂白成分都会破坏
试剂盒中反应试剂的生物活性.
9. 不能使用过期产品.
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置.
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用.
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水.
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回 4℃.
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL;
3. 样本孔中加入待测样本 50μL;空白孔不加.
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体
100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱
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