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elisa试剂盒和生化试剂盒该如何选择和评判【人elisa试剂盒】

发布时间:2021/6/15 8:33:36      阅读次数:877

 随着电子检验仪器的研制和普遍使用,推动了科研诊断试剂研究和使用广泛化的进程,商品试剂与标准液按检测项目组合成一套放在一个包装盒内叫试剂盒(reagent kit),或叫试剂组合(reagent set).

与自动化分析仪或者酶标仪匹配的试剂盒的研制 生产和供应走向产业化的道路,它无疑是科研检验发展史上一个巨大的技术进步.但是,试剂盒的质量,将严重影响测定结果的正确性.为了增强识别试剂质量的能力,提高拒用劣质试剂的自觉性,掌握有关试剂盒的质量标准和质量评价是十分有益的.

我们先来说说和自动生化分析仪想匹配的生化分析试剂盒的相关情况.此类试剂种类繁多,有液体型 粉剂型 片剂型,有单一试剂 双试剂 干试剂 多试剂等.

一 液体型试剂和粉(片)剂型试剂

(一)液体型试剂

无论是单试剂还是双试剂型试剂,目前乃至今后仍以液体型为主要剂型.其优点是液体型试剂的试剂组分高度均一,瓶间差异小,测定重复性好和使用方便;它也无需加入任何辅助试剂及蒸馏水,避免了外源性水质对试剂的影响,性能较稳定,测定结果较为准确.缺点是液体型试剂(尤其是酶试剂)保存时间较短,不便于运输.

1.液体单试剂

所谓液体单试剂就是将某种生化检验项目所用到的试剂科学地混合在一起,组成为一种试剂.应用时,只须将标本和试剂按一定比例混合,即可进行相应的生化反应,然后用适当的方法检测结果.应用十分方便.为了简化测定操作程序,提高工作效率,一度大多数试剂厂家都生产单试剂,以满足用户的需要.如测定葡萄糖和胆固醇的酶法试剂等.这些试剂的广泛使用,充分显示出酶法试剂无毒性 操作简便快速 测定结果可靠等优点.但对有些生化检验项目来说,单试剂存在抗干扰能力差的缺点,给测定结果带来相当大的分析误差.例如,甘油三酯测定的一步法试剂,由于未消除样品中的游离甘油,使测定结果中包括了内源性甘油(平均约为 0.11mmol/L),会给甘油三酯的测定值带来较大的误差.类似的情况还见于维生素C和尿酸及胆红素对Trinder+选用时值得注意.

2.液体双试剂

所谓液体双试剂就是将某些生化检测项目所用到的试剂,按用途科学地分成两类,分别配成两种试剂,通常试剂加入后可起到全部或部分消除某些内源性干扰的作用,第二试剂为启动被检测物质反应的试剂,两种试剂混合后才共同完成被检项目的生化反应.然后用适当的方法检测结果.双试剂型试剂盒,它保持了单试剂的优点,增强了抗干扰能力和试剂的稳定性,提高了测定的准确性,代表了诊断试剂盒剂型研制的主要发展方向.

(二)粉(片)剂型试剂

所谓粉剂型及片剂型试剂,即是将试剂的各组分用球磨技术粉碎成粉剂或混合后压成片剂,使用前再加入指定的溶液复溶成液体试剂.干粉试剂如果在冻干分装前是液体型的,则其各组分是相当均匀的;但如果用固体原料研磨后制成粉剂或片剂,则存在许多问题:

①要使试剂各组分混合得非常均匀,技术难度很大;

②分装过程中的称量误差及复溶时加水量的准确性影响试剂的瓶间差;

③水质优劣对试剂的稳定性和测定的可靠性有相当大的影响.

二 其它类型试剂

为了适应生化分析仪和测定方法学的进步,近年来研究了许多新型的试剂盒,主要有以下几种.

(一)快速反应试剂盒

快速反应试剂盒主要是为了适应生化分析的技术进步,缩短反应时间,提高工作效率.如血液葡萄糖快速测定试剂盒.其试剂成分及浓度为磷酸盐缓冲液 100mmol/ L,pH7.4±0.1,葡萄糖氧化酶 > 40u / ml,变旋酶 > 0.2u / ml,过氧化物酶 > 2.5u / ml,4-氨基安替比林 0.5 mmol/ L,4-羟基苯甲酸 4 mmol/L,亚铁qing化钾 1mg / L,叠氮钠 0.4g / L.同一般葡萄糖氧化酶法试剂相比是明显增加了葡萄糖氧化酶及过氧化物酶用量,更主要是增加了变旋酶,可使反应加快,3~4分钟后即生成终颜色.再如快速胆固醇试剂盒,用的是 pH6.6±0.2,250mmol/ L 磷酸盐缓冲液,胆固醇酯酶为 250u / L,胆固醇氧化酶 250 u/L,过氧化物酶 4000u / L,4-氨基安替比林 0.3mg /

L,DHBS 8mmol/ L.样品与试剂比例是 1:100.37℃反应 2 分钟即可完成反应.可以明显看出是加大胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶等效应酶用量,从而使反应加速.目前要求这种快速反应的试剂用户还不多,但它是一种发展趋势.

(二)一步法试剂盒

这是随着方法学的改进,特别是

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