当前位置：首页 > ELISA特殊高敏试剂盒> 科研 人艾滋病毒1+2抗体(HIV1+2Ab)检测试剂盒
| 反应种属 | 人 |
| 检测范围 | 判定阴阳性 |
| 物理性能 | 各液体组分澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。 |
| 用途 | 仅供科研使用，定性检测血清、血浆、细胞培养上清液中人艾滋病毒 1+2 抗体(HIV1+2Ab)。 |
| 实验原理 | 本试剂盒采用间接两步法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被人艾滋病毒 1+2抗体(HIV1+2Ab)捕获抗原（固相抗原）的微孔酶标板中，加入阴阳性对照和待测样本，经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，再加入 HRP 标记的检测抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，产生蓝色产物，在终止液作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品中待测抗体的浓度呈正相关，根据阈值判断阴阳性。 |
| 特异性 | / |
| 重复性 | / |
| 回收率 | / |
| 试验所需自备试验器材 | 1.标准规格酶标仪。 2.自动洗板机。 3.振荡器。 4.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。 |
| 操作程序 | 1、所有试剂和组分都先恢复到室温，阴阳性对照和样品，建议做复孔。 2、按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。 3、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。 4、设置阴阳性对照、样本孔和空白孔，阴阳性对照孔各加阴阳性对照 50μL，样本孔加适当稀释后的待测样本 50μL，空白孔不加，用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育 30min。 5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复 4 次（共洗板 5 次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。 6、除空白孔外，阴阳性对照孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体 100μL。 7、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 30min。 8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复 4 次（共洗板 5 次）。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。 9、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光温育 15min。 10、所有孔加入终止液 50μL，在 450nm 酶标仪上读取各孔吸光度（OD 值）。 |
| 注意事项 | 1：如果试剂盒的组份需要再次使用，请确保上一次使用之后没有被污染。 2：酶标板单次未使用完，要谨记密封放到 2-8℃保存。 |
| 问题分析 | ①问题描述：标准曲线差 可能原因及相应对策： 1.试剂盒平衡时间不够——不低于 2 个小时的室温平衡 2.吸取及洗涤不充分——充分的吸取及洗涤 3.移液不精确——检查和校正移液器 ②问题描述：精密度低 可能原因及相应对策： 1.洗涤不充分——按说明书要求充分洗涤和浸泡 2.混匀不充分和吸取试剂不足——充分混匀和吸取试剂 3.重复利用吸头、容器和覆膜——使用加样器要更换新的吸头、使用新的封板模 4.加样不精确——检查和校正移液器 ③问题描述：O.D值低 可能原因及相应对策： 1.每孔加的试剂量不精确——校正移液器，精确加入试剂 2.温育时间不正确——保证充足的温育时间 3.温育温度不正确——试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度 4.酶标记物或底物失效——通过混合酶标记物和底物，颜色迅速显现来检查 5.没有加入终止液——按照说明书实验操作步骤加入终止液 6.超出读数时间读数——在说明书推荐的读数时间内读数 ④问题描述：样本值 可能原因及相应对策： 1.不正确的样本储存方式——正确储存样本，使用新鲜样本进行实验 2.不正确的样本收集和处理方法——采取正确的样本收集和处理方法 3.待测物质在样本中含量低——使用新鲜样本，重复实验 |
| 声明 | 该试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。 |
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