| 反应种属 | 豚鼠 |
| 检测范围 | 10ng/mL-160ng/mL |
| 物理性能 | 液体组分应澄清，无沉淀或絮状物；所有组分应无包装破损。 |
| 用途 | 定量检测血清、血浆、细胞培养上清液、组织中豚鼠透明质酸(HA)的含量。 |
| 实验原理 | 本试剂盒采用竞争ELISA法，往预先包被透明质酸(HA)抗体的微孔板中依次加入样本/校准品和Asaay Diluent，经过温育洗涤，再加入SA-HRP温育。再次洗涤后加入底物TMB显色，室温显色并用终止液终止反应后读取OD值。OD值高低和样品中的透明质酸(HA)呈负相关。本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、快速等特点，对血清中透明质酸(HA)的减少或升高有可靠的检出性能。 |
| 特异性 | 本试剂盒识别天然和重组豚鼠透明质酸(HA)，与结构类似物无交叉。 |
| 重复性 | 批内变异系数 CV%小于 15%，批间变异系数 CV%小于 15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之间 |
| 试验所需自备试验器材 | 1、酶标仪（450nm） 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 1. 将各种试剂移至室温平衡两小时，取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水 1：20 稀释，混匀后备用。 2. 将预包被板从密封袋中取出，设一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品设 2 孔，每孔加入对应校准品 15μl；其余每个检测孔直接加待测血清或质控品 15μl。 3. 除空白孔外所有孔加入 Asaay Diluent 100μl，混匀，贴上封板膜，置 37℃温育 60 分钟。 4. 手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复 3 次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤 3 次程序洗板后拍干。 5. 每孔加入 SA-HRP 100μl（空白对照孔除外），混匀，贴上封板膜，置 37℃温育 30 分钟。 6. 手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置 10 秒甩干，重复 3 次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤 3 次程序洗板后拍干。 7. 每孔加 TMB 100μl，振荡混匀后，置 37℃避光显色 15 分钟，每孔加终止液 100μl。用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白对照孔调零点，然后测定各孔光密度值（OD值）。 |
| 注意事项 | 1：如果试剂盒的组份需要再次使用，请确保上一次使用之后没有被污染。 2：酶标板单次未使用完，要谨记密封放到 2-8℃保存。 |
| 问题分析 | ①问题描述：标准曲线差 可能原因及相应对策： 1.试剂盒平衡时间不够——不低于 2 个小时的室温平衡 2.吸取及洗涤不充分——充分的吸取及洗涤 3.移液不精确——检查和校正移液器 ②问题描述：精密度低 可能原因及相应对策： 1.洗涤不充分——按说明书要求充分洗涤和浸泡 2.混匀不充分和吸取试剂不足——充分混匀和吸取试剂 3.重复利用吸头、容器和覆膜——使用加样器要更换新的吸头、使用新的封板模 4.加样不精确——检查和校正移液器 ③问题描述：O.D值低 可能原因及相应对策： 1.每孔加的试剂量不精确——校正移液器，精确加入试剂 2.温育时间不正确——保证充足的温育时间 3.温育温度不正确——试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度 4.酶标记物或底物失效——通过混合酶标记物和底物，颜色迅速显现来检查 5.没有加入终止液——按照说明书实验操作步骤加入终止液 6.超出读数时间读数——在说明书推荐的读数时间内读数 ④问题描述：样本值 可能原因及相应对策： 1.不正确的样本储存方式——正确储存样本，使用新鲜样本进行实验 2.不正确的样本收集和处理方法——采取正确的样本收集和处理方法 3.待测物质在样本中含量低——使用新鲜样本，重复实验 |
| 声明 | 该试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。 |
ELISA试剂盒常见问题与解析
问题表现：标准曲线的R²值低于0.99，甚至出现“S”形或杂乱无章的趋势。
可能原因：
标准品稀释错误（梯度没做好或混匀不充分）。
标准品反复冻融导致降解。
酶标板洗涤不彻底，孔间残留液体影响吸光度。
解决方案：
标准品现配现用，避免多次冻融，稀释时严格按说明书操作。
确保洗涤步骤规范，洗板机喷嘴无堵塞，手工洗板时甩干并拍干。
如果曲线仍不理想，尝试更换标准品或检查酶标仪波长是否准确。
问题表现：样本OD值接近空白孔，无法有效检测目标蛋白。
可能原因：
样本中目标蛋白浓度过低（低于检测下限）。
抗体失效或孵育时间/温度不足。
样本处理不当（如反复冻融、未加蛋白酶抑制剂）。
解决方案：浓缩样本（超滤离心）或换用高灵敏度ELISA试剂盒。
检查抗体有效期，确保孵育时间充足（可适当延长）。
新鲜样本优先，避免反复冻融，必要时添加保护剂。
问题表现：空白孔或阴性对照OD值偏高，影响结果判读。
可能原因：
封闭不充分（封闭液选择不当或时间不足）。
抗体交叉反应或非特异性结合。
洗涤不彻底，残留试剂导致假阳性。
解决方案：
优化封闭条件（常用BSA或脱脂奶粉，封闭时间可延长至1-2小时）。
增加洗涤次数（如从3次增至5次），确保每孔洗涤液加满。
更换特异性更高的抗体，或调整一抗/二抗稀释比例。
问题表现：同一批样本检测，孔间差异大，CV值超过20%。
可能原因：
加样操作不一致（手法、速度差异）。
酶标板边缘效应（边缘孔蒸发快，温湿度不均）。
试剂未平衡至室温直接使用。
解决方案：
使用多通道移液器，统一加样速度和角度。
孵育时覆盖板盖，避免边缘孔干燥，可弃用边缘孔作空白。
所有试剂使用前室温平衡30分钟，避免温度差异影响反应效率。
1.样本处理：血清/血浆避免溶血，细胞裂解液需离心去除碎片，组织样本匀浆充分。
2.试剂保存：抗体、酶结合物等按说明书要求保存（-20℃分装避免反复冻融）。
3.仪器校准：定期检查移液器准确性，酶标仪做波长和光路校准。
4.对照设置：每板必设空白孔、阴性对照和阳性对照，监控系统误差。
如果实验结果异常，可以按以下步骤快速排查：
检查试剂：是否过期？是否正确保存？
回顾操作：孵育时间、温度、洗涤步骤是否规范？
分析数据：标准曲线是否正常？对照是否符合预期？
重复实验：换新试剂或调整条件后重试。
ELISA虽然操作简单，但“细节魔鬼”常常藏在加样、洗涤、孵育这些基础步骤里。遇到问题时，耐心对照说明书、排查关键环节，往往能事半功倍。如果反复失败，不妨联系试剂盒技术支持——毕竟，好的实验结果=靠谱的试剂+规范的操作+一点点的运气！
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