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| 项目名称 | 科研 唾液雌二醇(E2)检测试剂盒（测唾液） |
| 产品应用 | elisa |
| 检测范围 | 10→160pg/mL |
| 物理性能 | 各液体组分澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。 |
| 用途 | 定量检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中唾液雌二醇（E2） 的浓度。 |
| 实验原理 | 本试剂盒采用竞争ELISA法，往预先包被唾液雌二醇（E2）抗体的 微孔板中依次加入样本/校准品和生物素抗原，经过温育洗涤，再加入 SA-HRP 温育。再次洗涤后加入底物TMB显色，室温显色并用终止液 终止反应后读取OD值。OD值高低和样品中的唾液雌二醇（E2）呈 负相关。 本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、快速等特 点，对血清中唾液雌二醇（E2）的减少或升高有可靠的检出性能。 |
| 重复性 | 板内，板间变异系数均<10%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之间。 |
| 试验所需自备试验器材 | 1.酶标仪(450nm) 2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 4.蒸馏水或去离子水 |
| 操作程序 | 1. 计算并确定一次实验所需的预包被板条数，取出所需板条放置在 96 孔框架内，剩余微孔板放回铝箔袋密封，保存于 4℃。 2. 试剂盒和样本在室温下(25-28℃)平衡60min，充分平衡到室温（注意： 试剂盒和样本的平衡，非常重要，一定要平衡到足够时间）。 3. 设置标准品孔、样本孔和空白孔。 4. 空白孔什么都不加，标准品孔各加不同浓度的标准品 15μL； 5. 样本孔中加入待测样本 15μL（根据情况可适当稀释）； 6. 除空白孔外所有孔加入Asaay Diluent 100μl，混匀，贴上封板膜，室温（20-25℃）温育60分钟。 7. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 20s，甩 去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 8. 除空白孔外，每孔加入 SA-HRP 100μL，室温（20-25℃）温育 30min； 9. 重复步骤7； 10. 每孔加入 TMB 100μL，室温避光反应 10-15min。然后每孔加入终止液 100μL，测定 450nm 波长处各孔的 OD值。 |
| 注意事项 | 试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验拉梯度，以确定稀释倍数)。 |
| 问题分析 | ①问题描述：阴阳性对照结果不稳定 可能原因及相应对策： 1.吸液或加液不准——检查移液器及吸头 2.平衡时间太短——保证充足的平衡时间 3.洗涤不完全——保证洗涤时间和洗涤次数及每孔的加液量 ②问题描述：显色很弱或无色 可能原因及相应对策： 1.孵育时间太短——保证充足的孵育时间 2.实验温度不正确——使用推荐的实验温度 3.试剂体积不够或漏加/稀释不正确——检查吸液及加液过程，保证所有试剂按顺序足量添加 4.酶标记物失活或底物失效——混合酶结合物和底物，通过迅速显色来检查判断 ③问题描述：读数数值低 可能原因及相应对策： 1.酶标仪设置不正确——在酶标仪上检查波长及滤光片设置/提前打开酶标仪预热 ④问题描述：变异系数大 可能原因及相应对策： 1.加液不正确——检查加液情况 ⑤问题描述：背景值高 可能原因及相应对策： 1.检测抗体的工作浓度过高——使用推荐的稀释倍数 2.酶标板洗涤不完全——保证每步清洗完全；如果用自动洗板机，请检查所有的出口是否有堵塞；是否使用试剂盒配备的洗涤液 3.洗液有污染——配制新的洗液 ⑥问题描述：灵敏度低 可能原因及相应对策： 1.ELISA试剂盒保存不当——按说明书要求保存相关试剂 2.读数前未终止——OD读数前应在每孔中加入终止液 |
| 声明 | 试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。 |
ELISA试剂盒常见问题与解析
问题表现：标准曲线的R²值低于0.99，甚至出现“S”形或杂乱无章的趋势。
可能原因：
标准品稀释错误（梯度没做好或混匀不充分）。
标准品反复冻融导致降解。
酶标板洗涤不彻底，孔间残留液体影响吸光度。
解决方案：
标准品现配现用，避免多次冻融，稀释时严格按说明书操作。
确保洗涤步骤规范，洗板机喷嘴无堵塞，手工洗板时甩干并拍干。
如果曲线仍不理想，尝试更换标准品或检查酶标仪波长是否准确。
问题表现：样本OD值接近空白孔，无法有效检测目标蛋白。
可能原因：
样本中目标蛋白浓度过低（低于检测下限）。
抗体失效或孵育时间/温度不足。
样本处理不当（如反复冻融、未加蛋白酶抑制剂）。
解决方案：浓缩样本（超滤离心）或换用高灵敏度ELISA试剂盒。
检查抗体有效期，确保孵育时间充足（可适当延长）。
新鲜样本优先，避免反复冻融，必要时添加保护剂。
问题表现：空白孔或阴性对照OD值偏高，影响结果判读。
可能原因：
封闭不充分（封闭液选择不当或时间不足）。
抗体交叉反应或非特异性结合。
洗涤不彻底，残留试剂导致假阳性。
解决方案：
优化封闭条件（常用BSA或脱脂奶粉，封闭时间可延长至1-2小时）。
增加洗涤次数（如从3次增至5次），确保每孔洗涤液加满。
更换特异性更高的抗体，或调整一抗/二抗稀释比例。
问题表现：同一批样本检测，孔间差异大，CV值超过20%。
可能原因：
加样操作不一致（手法、速度差异）。
酶标板边缘效应（边缘孔蒸发快，温湿度不均）。
试剂未平衡至室温直接使用。
解决方案：
使用多通道移液器，统一加样速度和角度。
孵育时覆盖板盖，避免边缘孔干燥，可弃用边缘孔作空白。
所有试剂使用前室温平衡30分钟，避免温度差异影响反应效率。
1.样本处理：血清/血浆避免溶血，细胞裂解液需离心去除碎片，组织样本匀浆充分。
2.试剂保存：抗体、酶结合物等按说明书要求保存（-20℃分装避免反复冻融）。
3.仪器校准：定期检查移液器准确性，酶标仪做波长和光路校准。
4.对照设置：每板必设空白孔、阴性对照和阳性对照，监控系统误差。
如果实验结果异常，可以按以下步骤快速排查：
检查试剂：是否过期？是否正确保存？
回顾操作：孵育时间、温度、洗涤步骤是否规范？
分析数据：标准曲线是否正常？对照是否符合预期？
重复实验：换新试剂或调整条件后重试。
ELISA虽然操作简单，但“细节魔鬼”常常藏在加样、洗涤、孵育这些基础步骤里。遇到问题时，耐心对照说明书、排查关键环节，往往能事半功倍。如果反复失败，不妨联系试剂盒技术支持——毕竟，好的实验结果=靠谱的试剂+规范的操作+一点点的运气！
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顾客至上,品质服务
客户服务--如果我们不能使客户满意，会有其他人这么做！
客户是我们的服务，产品质量的定义者，秉持：诚信原则，非常重视客户的意见与感受；在所提供的品质产品及服务中获得合理利润的前提下，使我们尊敬的客户满意是至关重要的！因为如果我们做不到，会有其他人这么做。
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客户服务承诺
1. 客户服务--如果我们不能使客户满意，会有其他人这么做。 向以“服务、客户、技术”为根本。客户是 的核心；客户是我们的服务、产品质量的定义者， 秉持：诚信原则，非常重视客户的意见与感受；在所提供的品质产品及服务中获得合理利润的前提下，使我们尊敬的客户满意是至关重要的！因为如果我们做不到，会有其他人这么做。
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